...DNA样品,经琼脂糖凝胶(Agarose)电泳,检查所提DNA的质量及降解情况。(二)组织DNA的制备(1)将200mg组织在冰浴条件下用消毒剪刀充分剪碎,加4ml 1×RSB缓冲液(10mmol/L Tris, pH7.4;10mmol/...
...DNA很少,0.5μg甚至更少即可。PCR的模板DNA制备方法很多,除上述两种方法外,还有更简便的直接水煮法(Sle-bos,et al, 1990;Smit, et al. 1988)、蛋白酶消化法(Impraim et al. 1987...
...在0.5ml离心管内进行,反应总体积为50μl,内含模板DNA350ng,DNA引物各50pmol/L,dGTP、dCTP和dTTP各200μmol/L,[α-32P]dATp 1.1×106Bq,反应缓冲液为67mmol/l Tris—...
...于是碱基外露,260nm紫外吸收值因而增加,这一现象称为增色效应(hyperchromic effect)。见图18-2。图18-2 DNA的增色反应如果升高温度使DNA变性,以温度对紫外吸收作图,可得到一条曲线,称为溶解曲线(见图18-3)...
...DNA含量分析技术是80年代以来迅速发展的一门新型检测技术,已广泛应用于肿瘤临床及基础理论的研究。其中流式细胞术(Flowcytometry,FCM)是一种快速定量分析细胞核DNA含量的技术,其在推测患者预后及治疗反应上具有重要的价值[1...
...部分序列的全长cDNA进行分子克隆,建立全长的DNA探针。适用于基因游走、转位因子和已知序列DNA旁侧病毒整合位点分析等研究。图22-2 反向PCR原理示意图波浪线代表靶DNA,方块代表测翼序列,▲和△代表限制酶切位点,寡核苷酸引物与模板...
...抗-DNA 抗DNA抗体包括抗双链DNA抗体、抗单链DNA抗体和抗zDNA抗体。 检验中一般是指与双链DNA和单链DNA都反应的抗双链DNA抗体。 抗双链DNA抗体阳性是系统性红斑狼疮的标志,阳性率达90%以上,有较高的特异性,因而抗双链...
...基因是遗传的物质基础,它决定了病原体的生物特性。除个别病毒外,现知的所有微生物均是以核酸为遗传物质。乙肝病毒的基因是脱氧核糖核酸(DNA),与病毒复制所必需的DNA聚合酶关系密切。因此基因检测成为乙肝检测组成部分。 25cpm。 (1)...
...、pUC18、pUC19等,噬菌载体有M13噬菌体载体等。图24-1 质粒载体的定向克隆一、质粒或噬菌体载体与外源DNA的连接反应外源DNA片段末端的性质,以及质粒载体和外源DNA上限制酶切位点的性质决定了质粒或噬菌体与外源DNA连接反应的...
...为3.3kb,用Eoor I和SalI双酶切后会出现600bp和-2.7kb两个DNA片段,提取转化细菌的质粒DNA作酶切后做电泳观察其酶切图谱,就能分析得结果;如插入的目的序列中有其它限制性内切酶位点,也能在酶切电泳图谱上观察到。这就可以...
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